Purification and characterization of trypsin from intestinal and pyloric caecal tissues from the silk snapper, Lutjanus vivanus (Cuvier, 1828)

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Author
Rivera-Santos, Mishelle
Advisor
Uscian, John M.Type
ThesisCollege
College of Arts and Sciences - SciencesProgram
BiologyDepartment
Department of BiologyDegree Level
M.S.Date
2003Metadata
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In an effort to better understand the chemical digestion of proteins in the silk
snapper, Lutjanus vivanus (Cuvier, 1828), and thereby obtain a deeper understanding of
how this fish meets its dietary needs for amino acids through its trophic environment,
trypsin was purified 10-fold from intestinal and pyloric caecal tissues by sequential
application of ammonium sulfate fractionation, size exclusion chromatography, and
affinity chromatography. Standard kinetic characteristics of this enzyme were
determined. The enzyme displayed optimal activity at pH 8 and 60oC. It was completely
or nearly completely inhibited by soybean trypsin inhibitor (SBTI) at a concentration of
0.1% or higher. SDS-PAGE analysis of the purified enzyme revealed a single band with
an estimated molecular weight of 26.1 kDa. Tripsina proveniente del tejido intestinal y ciego pilórico del Chillo de ojo
amarillo, Lutjanus vivanus (Cuvier, 1828) fue purificada y caracterizada. Dicho estudio
se realizó en el esfuerzo por un mejor entendimiento sobre la digestión química de las
proteínas y cómo este pez suple su necesidad de aminoácidos a través de hábitat donde se
alimenta. La enzima fue purificada 10 veces mediante proceso de precipitación con
sulfato de amonio, seguido por cromatografía de exclusión por tamaño y cromatografía
de afinidad. Características sobre la cinética de tripsina, incluyendo el efecto de la
temperatura, pH e inhibidor sobre la hidrólisis del sustrato artificial TAME, fueron
determinadas. La enzima presentó actividad óptima a pH 8.0 y a 60oC. Tripsina fue
parcialmente o completamente inhibida, por el inhibidor de soya de tripsina (SBTI por
sus siglas en ingles) a concentración de 0.1% o más. En el análisis de la electroforesis
SDS-PAGE de la proteína purificada, se pudo observar una banda sencilla con un peso
molecular estimado de 26.1 kDa.